Génération de lignées cellulaires CRISPR-Cas9 pour évaluer le rôle de variants TMPO/LAP2 associés à des cardiomyopathies
Responsable du Stage : Dr Brigitte Buendia, CR-CNRS
Tél : 01 57 27 79 58
E-mail: brigitte.buendia@u-paris.fr
Université de Paris-UMR8251-CNRS BFA
Myologie Fondamentale et translationnelle
(http://www.bfa.univ-paris-diderot.fr)
Résumé du Projet de Stage
Nous avons étudié dans différents modèles cellulaires et de souris, l’impact de variants du gène LMNA qui sont associés à
différentes pathologies. Ce gène code pour les lamines A/C, protéines nucléaires. Présentement, nous étudions des variants du gène TMPO qui code pour les protéines nucléaires LAP2, partenaires des lamines A/C.
Les cardiomyopathies familiales sont des maladies du muscle cardiaque dont l’origine génétique n’est toujours pas identifiée pour environ la moitié des patients. Nos collaborateurs (Centre de génétique moléculaire- Hôpital Pitié-Salpêtrière) ont identifié 3 nouveaux variants du gène TMPO/LAP2 parmi une cohorte de 2100 patients atteints de cardiomyopathies (2021- article soumis).
Nos projets visent à évaluer le rôle causal ou modificateur des trois variants TMPO nouvellement identifiés, en analysant les histoires familiales, les prédictions in silico de l’effet de ces variants et l’impact de leur expression dans différents modèles cellulaires. Notre observation selon laquelle un des variants conduirait à de l’haploinsuffisance, suggère que le niveau d’expression de LAP2α aurait un impact sur la fonction du coeur, en accord avec un modèle de souris knock-out (Gotic et al. 2010).
L’étudiant(e) que nous allons recruter contribuera au projet visant à modifier le gène TMPO dans une lignée de cardiomyocytes de souris avec la méthode de CRISPR-CAS9. Prenant en compte nos résultats préalables, les lignées seront modifiées soit pour éteindre l’expression de LAP2α soit pour induire l’expression d’un variant. Les clones selectionnés seront analysés selon divers critères (expression de LAP2α et partenaires vs caractéristiques des cellules pour leur morphologie, capacité à proliférer et à se contracter).
Au final ce travail permettra d’évaluer l’impact de l’expression des variants TMPO sur des fonctions spécifiques des cardiomyocytes.
Financement du projet par la Fédération Française de Cardiologie
Publications de l’équipe relatives au projet de stage
2018 – Samson C, Petitalot A, Celli F, Herrada I, Ropars V, Le Du MH, Nhiri N, Jacquet E, Arteni AA, Buendia B, Zinn-Justin S. Structural analysis of the ternary complex between lamin A/C, BAF and emerin identifies an interface disrupted in autosomal recessive progeroid diseases. Nucleic Acids Research. 46(19):10460-10473. doi: 10.1093/nar/gky736
2017a – Barateau, A., Vadrot, N., Vicart, P., Ferreiro, A., Mayer, M., Héron, D., Vigouroux, C. and B. Buendia. A novel lamin A mutant responsible for congenital muscular dystrophy causes distinct abnormalities of the cell nucleus. PLoS One. 12(1). doi: 10.1371/journal.pone.0169189
2017b– Barateau, A., Vadrot N., Agbulut, O., Vicart, P., Batonnet-Pichon, S. and B. Buendia. Distinct Fiber Type Signature in Mouse Muscles Expressing a Mutant Lamin A Responsible for Congenital Muscular Dystrophy in a Patient. Cells, 6, 10; doi:10.3390/cells6020010
2017c- Paulsen, J., . Sekelja, M., Oldenburg, A.R., Barateau, A., Briand, N., Delbarre, E., Shah, A., Sorensen, A.L., Vigouroux, C., Buendia, B. and P. Collas. Chrom3D : Three dimensional genome modeling from Hi-C and nuclear lamin-genome contacts. Genome Biology, 18:21. doi: 10.1186/s13059-016-1146-2.
2015 – Vadrot, N., Duband-Goulet, I, Cabet, E., Attanda, W., Barateau, A., Vicart, P., Gerbal, F., Briand, N., Vigouroux, C., Oldenburg, A.R., Lund, E.G., Collas, P. and B. Buendia. The p.R482W substitution in A-type lamins deregulates SREBP1 activity in Dunnigan-type familial partial lipodystrophy. Human Molecular Genetics Apr 1;24(7):2096-109. doi: 10.1093/hmg/ddu728. Epub 2014 Dec 18.
Ce projet s’inscrit-il dans la perspective d’une thèse :
oui X
ED d’appartenance : BioSPC
Stage Brigitte Buendia-Eq4-BFA
Equipe d’Accueil : Myologie Fondamentale et translationnelle
Intitulé de l’Unité : BFA- UMR 8251- CNRS
Nom du Responsable de l’Unité : Pr Jean-Marie Dupret
Nom du Responsable de l’Équipe : Dr Ana Ferreiro
Adresse : Université de Paris. Unité Biologie Fonctionnelle et Adaptative- UMR CNRS 8251-
Bâtiment Lamarck- case courrier 7006- 5 rue M-A Lagroua Weill-Hallé. 75205 Paris Cedex 13